Exposición del antígeno T eritrocitario por acción de Ascaris lumbricoides / Exposure of erythrocyte T antigen by Ascaris lumbricoides action / Exposição do antígeno T eritrocitário por ação de Ascaris lumbricoides

La poliaglutinabilidad de los glóbulos rojos puede deberse al desenmascaramiento del antígeno T críptico debido a la acción de neuraminidasas microbianas que eliminan residuos terminales de ácido siálico en la membrana del hematíe. En experiencias preliminares se demostró que Ascaris lumbricoides capta ácido siálico del eritrocito y que las suspensiones globulares en medio enzimático, incubadas con este parásito, pierden totalmente la capacidad de agregación. El objetivo fue estudiar la exposición del antígeno T eritrocitario, por acción de A. lumbricoides sobre la carga aniónica de glóbulos rojos deficientes en ácido siálico. Se trabajó con 48 extractos de ejemplares adultos del parásito ([EA]) y un concentrado de larvas L1/ L2 ([CLAL]):1300-1500 larvas/mL). Se utilizaron eritrocitos Grupo O en medio enzimático de bromelina (GRB) y eritrocitos Control en medio salino (GRC). El sedimento globular de GRB se incubó con igual volumen de [EA]/ [CLAL] y el de GRC con solución fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Se realizaron Pruebas de Aglutinación en Placa y en Tubo, enfrentando los GRB y GRC a sueros humanos de adulto y de cordón. Los resultados mostraron que el 33,33% de los GRB incubados con [EA] y el 66,67% de los GRB incubados con [CLAL] aglutinaron con suero de adulto, pero no con suero de cordón. Los GRC no aglutinaron con ninguno de los sueros. Es la primera vez que se comunica la exposición del antígeno T eritrocitario por acción de un parásito. La activación T podría producir autoaglutinación y hemólisis en el hombre adulto y representaría un factor de riesgo transfusional en la población infantil.

Red cell polyagglutination may be due to the unmasking of the cryptic T antigen by the action of microbial neuraminidases, which remove terminal sialic acid residues in the erythrocyte membrane. Previous experiences showed that Ascaris lumbricoides capture erythrocyte sialic acid and thatglobular suspensions in enzymatic medium, incubated with this parasite, completely lost the ability to aggregate. The aim of this work was to study the erythrocyte T antigen exposure by A. lumbricoides action on the anionic charge of sialic acid deficient red cells. Studies were done on 48 adult specimen parasite extracts ([AE]) and an L1/ L2 larvae concentrate ([ALLC]: 1300-1500 larvae/mL). Group O red cells in bromelain enzymatic medium (RCB) and Control erythrocytes in saline medium (RCC) were used. The RCB sediment was incubated with an equal volume of [AE]/ [ALLC] and the RCC sediment with physiological solution during 120 minutes at 37 ºC. Plate and Tube Agglutination Tests were performed, contrasting RCB and RCC with adult and cord human sera. The results showed that 33.33% of the RCB incubated with [AE] and 66.67% of the RCB incubated with [LCAL] agglutinated with serum from adult, but not cord serum. RCB were not agglutinated with any of the sera. It is the first time that erythrocyte T antigen exposure by a parasite action is communicated. T activation could produce autoagglutination and haemolysis in the adult and would represent a transfusion risk factor in the child population.

A poliaglutinabilidade dos glóbulos vermelhos pode ser resultado do desmascaramento do antígeno críptico T devido à ação de neuraminidases microbianas que eliminam resíduos terminais de ácido siálico na membrana da hemácia. Em experiências preliminares foi demonstrado que Ascaris lumbricoides capta ácido siálico do eritrócito e que as suspensões globulares em meio enzimático, incubadas com esta parasita, perdem totalmente a capacidade de agregação. O objetivo foi estudar a exposição do antígeno T eritrocitário, por ação de A. lumbricoides sobre a carga aniônica de glóbulos vermelhos deficientes em ácido siálico. Trabalhou-se com 48 extratos de exemplares adultos da parasita ([EA]) e um concentrado de larvas L1/ L2 ([CLAL]):1300-1500 larvas/mL). Foram utilizados eritrócitos Grupo O em meio enzimático de bromelina (GVB) e eritrócitos Controle em meio salino (GVC). O sedimento globular de GVB foi incubado com igual volume de [EA]/ [CLAL] e o de GVC com solução fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Foram realizados Testes de Aglutinação em Placa e em Tubo, enfrentando os GVB e GVC a soros humanos de adulto e de cordão. Os resultados mostraram que 33,33% dos GVB incubados com [EA] e 66,67% dos GVB incubados com [CLAL] aglutinaram com soro de adulto, mas não com soro de cordão. Os GVC não aglutinaram com nenhum dos soros. É a primeira vez que se comunica a exposição do antígeno T eritrocitário por ação de uma parasita. A ativação T poderia produzir autoaglutinação e hemólise no homem adulto e representaria um fator de risco transfusional na população infantil.

Alteración de la carga eritrocitaria utilizando el método de azul Alcian en extractos de Ascaris lumbricoides / Change of erythrocyte charge with the use of Alcian blue method in Ascaris lumbricoides extracts

Introducción: el estudio de las interacciones hospedador-parásito es un nuevo desafío para comprender aspectos del metabolismo parasitario, los mecanismos de invasión, escape inmunológico y daño. Ascaris lumbricoides puede provocar anemia y trombosis. Previamente se demostró que este parásito altera la carga superficial eritrocitaria, lo cual indica que puede captar ácido siálico del glóbulo rojo. Objetivo: estudiar el efecto producido por extractos del parásito adulto sobre la carga eritrocitaria, utilizando el método de azul Alcian y comparar su sensibilidad con el método de Polibrene. Métodos: se trabajó con 55 extractos parasitarios [EA] y con suspensiones de eritrocitos grupo O. Se realizó el tratamiento de los glóbulos incubando el sedimento con igual volumen de [EA] a 37 ºC durante 1 h. El Control (eritrocitos sin contacto con [EA]) fue incubado con tampón fosfato pH 7,4. Se aplicó el método de azul Alcian y se determinó la carga aniónica eritrocitaria porcentual (CAE por ciento) en el Control y en los glóbulos tratados. Se definió el coeficiente experimental de carga aniónica eritrocitaria (Cexp CAE), como el cociente entre CAE por ciento final e inicial. Resultados: se observó que 27 de los 55 [EA] (49,1 por ciento) modificaron la carga de los glóbulos rojos, el Cexp CAE para estos eritrocitos resultó 0,75 ± 0,1144 y para los que no mostraron variación de carga de 0,94 ± 0,04450. El análisis estadístico concluyó que los métodos de Polibrene y de azul Alcian tienen sensibilidades comparables (p> 0,20). Conclusiones: Ascaris lumbricoides es capaz de captar ácido siálico del eritrocito, lo que contribuiría a explicar la trombosis atribuida al parásito, pero también sugeriría que el nematodo lo podría utilizar en sus rutas metabólicas o en sus estrategias de evasión inmunológica.

Introduction: the study of the host-parasite interactions is a new challenge to understanding some aspects of the parasitic metabolism and the mechanisms of invasion, immunological evasion and damage. Ascaris lumbricoides may cause anemia and thrombosis. It was previously shown that Ascaris lumbricoides modified the superficial charge of erythrocytes, which means that the parasite can capture sialic acid from the red blood cell. Objective: to study the effect of adult parasite extracts on the erythrocyte charge using the Alcian Blue method and to compare its sensitivity with the Polybrene method. Methods: fifty five adult parasite extracts and Group O erythrocyte suspensions were used. The erythrocytes were treated by incubating the sediment with an equal volume of parasite extracts for one hour at 37 ºC. The control group (erythrocytes without any contact with the parasite extracts) was incubated with pH 7.4phosphate buffer solution. Alcian Blue method was applied and the percentage erythrocyte anionic charge was determined in the control group and in the treated red cells. The experimental coefficient of erythrocyte anionic charge was defined as the quotient between the initial and the final percentage erythrocyte anionic charge. Results: it was shown that 27 out of 55 parasite extracts (49.1 percent) modified the charge of the red blood cells, being their experimental coefficient of the erythrocyte anionic charge 0.75 ± 0.1144 whereas the same coefficient amounted to 0,94 ± 0.0445 for those which did not show any charge variation. The statistical analysis concluded that the Polybrene and Alcian Blue Methods had comparable sensitivities (p>0.20). Conclusions: A. lumbricoides is able to capture sialic acid from the erythrocyte, which would not only explain the thrombosis attributed to the parasite, but also suggest that the nematode could use this acid either in its metabolic routes or for its strategies of immunological evasion.

Captación de ácido siálico por larvas de Ascaris lumbricoides durante incubación in vivo / Sialic acid capture by Ascaris lumbricoides larvae during in vivo incubation / Captação de ácido siálico por vermes de Ascaris lumbricoides durante incubação in vivo

La agregación eritrocitaria afecta la microcirculación y su estudio es importante en las vasculopatías. Se comunicó que Ascaris lumbricoides puede capturar ácido siálico (AS) del eritrocito y alterar la carga aniónica del glóbulo. El objetivo de este trabajo fue estudiar la captación de AS por larvas de A. lumbricoides incubadas in vivo con eritrocitos. Se trabajó con un concentrado de larvas ([CLAL]) incubado en 4 tubos con buffer fosfato y antibióticos. En dos se agregaron eritrocitos Grupo O. Los restantes fueron controles. Se incubaron a 37 °C (5% CO2) durante 24 y 48 horas. Las larvas fueron separadas, recolectadas, concentradas y contadas microscópicamente (larvas/mL: [CLAL]1: 1500-1700; [CLAL]3 1600-1800; [CLAL]2 y 4: 200400). Se utilizaron las técnicas de Inhibición de la Agregación por Polibrene (IAP) y Alcian Blue (AB). La IAP mostró una diferencia significativa entre los Títulos de Polibrene diluido en solución fisiológica y en [CLAL]1 y 2 que fueron incubados con eritrocitos 24 y 48 horas respectivamente. No hubo variación en el Título de los Controles correspondientes ([CLAL]3 y [CLAL]4). AB realizada en [CLAL]1 y [CLAL]3, determinó CASCap%= 6,65% ± 0,36 y CAS[CLAL]3% = 0,67% ± 0,36. La experiencia demostró la captación de AS por las larvas incubadas in vivo con eritrocitos y sugirió que ellas no presentan AS intrínseco. El secuestro de AS durante la migración larvaria podría ser importante en la interacción parásito-hospedador.

Erythrocyte aggregation affects microcirculation and its study is important in vascular diseases. It was communicated that Ascaris lumbricoides can capture erythrocyte sialic acid (SA) and alter the anionic charge on the red cell. The aim of this work was to study SA capture by A. lumbricoides larvae incubated in vivo with erythrocytes. Work was performed with concentrated larvae ([ALLC]) incubated in 4 tubes with phosphate buffer and antibiotics. Group O erythrocytes were added in two Tubes. The remaining were Controls. They were incubated at 37 °C (5% CO2) for 24 and 28 hours. The larvae were separated, collected, concentrated and counted microscopically (larvae/mL: [ALLC]1:1500-1700; [ALLC]3: 1600-1800; [ALLC]2 and 4: 200- 400). Aggregation Inhibition by Polybrene (AIP) and Blue Alcian (BA) techniques were used. AIP showed a significant difference between Polybrene Titers diluted with physiological solution and with [ALLC]1 and 2, which were incubated with erythrocytes 24 and 48 hours respectively. There was no change in the Title of the corresponding Controls. BA performed in [ALLC]1 and [ALLC]3 determined CapSAC = 6.65% ± 0.36 and SAC[CLAL]3 %= 0.67% ± 0.36. The experience showed SA capture by larvae incubated in vivo with erythrocytes and it suggested that they have no intrinsic SA. SA kidnapping during the larval migration could be important in parasite-host interaction.

A agregação eritrocitária afeta a microcirculação e seu estudo é Importante nas vasculopatias. Foi comunicado que o Ascaris lumbricoides pode capturar ácido siálico (AS) do eritrocito e alterar a carga aniônica do glóbulo. O objetivo deste trabalho foi estudar a captação de AS por vermes de A. lumbricoides incubados in vivo com eritrocitos. Trabalhouse com uma concentração de larvas ([CLAL]) incubada em 4 tubos com buffer fosfato e antibióticos. Em dois foram agregados eritrocitos Grupo O. Os restantes foram controles. Foram incubados a 37 °C (5% CO2) durante 24 e 48 horas. As larvas foram separadas, coletadas, concentradas e contadas microscopicamente (larvas/mL: [CLAL]1: 1500-1700; [CLAL]3 1600-1800; [CLAL]2 e 4: 200-400). As técnicas utilizadas foram de Inibição da Agregação por Polybrene (IAP) e Alcian Blue (AB). A IAP mostrou uma diferenga significativa entre os Títulos de Polybrene diluido em solução fisiológica e em [CLAL]1 e 2 que foram incubados com eritrocitos 24 e 48 horas respectivamente. Näo houve variação no Título dos Controles correspondentes ([CLAL]3 e [CLAL]4). AB realizada em [CLAL]1 e [CLAL]3, determinou CASCap%= 6,65% ± 0,36 e CAS[CLAL]3% = 0,67% ± 0,36. A experiencia demons-trou a captação de AS pelos vermes incubados in vivo com eritrócitos e sugeriu que eles näo apresentam AS intrínseco. O sequestro de AS durante a migração de larvas poderia ser importante na interação parasita-hospedeiro.

Absorción de antígenos solubles ABH por larvas de Ascaris lumbricoides in vitro / Absortion of ABH soluble antigens by Ascaris lumbricoides larvae in vitro

En investigaciones previas se identificaron antígenos ABH en ejemplares adultos de Ascaris lumbricoides. Los parásitos sólo presentaron epitopes expresados en sus respectivos hospedadores, adquiridos por absorción. Como el parásito adulto vive en el intestino delgado, podría presentarlos debido a que la larva de cuarto estadio conserva los epitopes absorbidos en la migración y los mantiene durante el proceso madurativo a adulto o bien el ejemplar adulto los adquiriría de las secreciones intestinales. El objetivo fue estudiar la absorción de epitopes solubles ABH por larvas mantenidas en cultivo. Las larvas fueron obtenidas de la eclosión de huevos y se recolectaron y cultivaron en medio RPMI. Se adicionó antígeno soluble B en tres tubos que fueron incubados 2, 3 y 6 días y antígeno soluble A en dos tubos cultivados 6 días. Cada tiempo de cultivo tuvo su control negativo de absorción, donde se investigaron productos de excreción-secreción (ES) Tipo antígenos ABH. La técnica de Inhibición de la Aglutinación Semicuantitativa demostró epitopes B en las larvas cultivadas 3 días y en las incubadas 6 días epitopes A y B. Solamente se evidenciaron productos ES símil A y B en el Control de 6 días. Se concluye que A. lumbricoides puede absorber determinantes ABH a partir de antígenos solubles.

Previous experiences have identified ABH antigens in A. lumbricoides's adult specimens. The parasites only showed epithopes expressed in their respective hosts. It was demonstrated that epithopes are acquired by absorption by means of the culture of larvae with erythrocytes. As the adult parasite lives in the small intestine, it could be present there because the fourth stage larva retains the epithopes absorbed in the migration and keeps them during the maturation process to adult, or the adult specimen would acquire them from intestinal secretions. Larvae were obtained by hatching of eggs and they were collected and cultured in RPMI medium. The aim of this work was to study the ABH soluble epithopes by larvae in culture. B soluble antigen was added into three tubes, which were incubated for 2, 3 and 6 days, and A soluble antigen was poured into two tubes, both cultured for 6 days. Each culture time had its absorption Negative Control where ABH like antigen excretion/secretion products (ES) were investigated. The Semiquantitative Inhibition Agglutination Test showed B epithopes in the larvae cultured for 3 days and A and B epithopes in the larvae incubated for 6 days. Similar A and B ES products were only evidenced in the Control of 6 days. The results conclude that A. lumbricoides may absorb ABH antigenic determiners from soluble antigens.